轻小说《 魔法禁书目录 》及其外传漫画《 科学超电磁炮 》中人物。学园都市排名第三位的超能力者 御坂美琴 的克隆体，借由美琴的 脱氧核糖核酸 图谱诞生，有超过20000名。原利用于“ 量产型 能力者计划”，后在“绝对能力者进化计划”实验中作为对 一方通行 的杀戮对象，被杀死超过1万名。通过相同的脑电波与其他妹妹们的大脑相连接构筑“ 御坂网络 ”，彼此达到信息共享。拥有和素体御坂美琴同样的外貌，两者的区别是头上是否戴着军用 夜视镜 。瞳孔暗淡无光，表情变化少，有着不经心和不用心的性格。
角色形象
注：文中未作特殊说明的“御坂妹妹”或“妹妹们”均指代检体番号00001-20000号“妹妹”。
设定
“妹妹们（シスターズ）”又作“御坂妹妹”，泛指学园都市第三位的超能力者 御坂美琴 的体细胞克隆体的总称。但通常情况下仅指代检体番号在00001-20000号的克隆体，单价18万日元。
“御坂妹妹”的制造分为“ 量产型 能力者计划”和“绝对能力者进化计划”两个阶段。最初的“妹妹们”有20002名，除检体番号1~20000号外，还有行踪不明、与“御坂网络”切断的御坂0号（桃莉姐妹）和作为上位个体的20001号最后之作（是为防止“妹妹们”反叛、失控而制作的安全装置）。其中，1-10031号共10031名“妹妹们”在“绝对能力者进化计划”的实验中被 一方通行 杀死。检体番号10032-20000号的“妹妹们”由于 上条当麻 的干预实验终止得以存活。
在“第三次制造计划”还制造出 番外个体 ，不在检体番号序列内。
诞生
以治疗肌肉萎缩为名，由幼年的 御坂美琴 提供 脱氧核糖核酸 图谱发端，在“ 量产型 能力者计划”中被制造出来。在使用了Zid-02、Riz-13、Hel-03等药物，十四天后就可以得到与 超电磁炮 相同的肉体。但是由于“妹妹们”的性能连其素体御坂美琴的百分之一都没有，因此“量产型能力者计划”被永久冻结。
此后转而作为“绝对能力者进化计划”的实验动物，在“量产型能力者计划”和“绝对能力进化实验”中有超过两万名“御坂妹妹”被制造出来。
在“绝对能力进化实验”中共有10031名“妹妹”惨遭 一方通行 的虐杀。在实验终止后，为了克服使用药物强行加速成长而造成寿命被缩短的结果（最多只有一两年的寿命），“妹妹们”被送到全世界各个学园都市的协力机构接受身体调整。实际上，“妹妹们”是作为统括理事长亚雷斯塔营造“人工天界”的媒介，假借“绝对能力进化实验”失败而被送到世界各地，从而构建覆盖全球的AIM网络，使原本只存在于学园都市内的 虚数 学区，扩张到全世界的范围，用以对抗魔法阵营。
为了方便“实验”，他们打扮得跟原型 御坂美琴 一样，即使在实验结束后，仍然保留了这一习惯。在番外恶搞篇《とある暗部の下着论争》中，为了充分利用御坂妹妹们的性能，研究方尽量使所有的条件都接近于其本体御坂美琴，并再现本体的环境，其中包括发型、制服等都保持和本体一致。制服是经由“学舍之园”内部的工作人员偷来，但是却始终无法获得御坂美琴内衣裤的资料，研究员们并为此争辩不休。曾申请使用“ 树形图 设计者”模拟出 御坂美琴 的生活，但遭到拒绝；派出的猎犬部队在 常盘台中学 宿舍也遭 舍监 全灭。最终由 芳川桔梗 购置了两万份的御坂妹妹内衣裤平息了这场争辩。在官方 四格漫画 中，为完全模拟本体 御坂19090号 美琴 的生活环境，三名中年研究员更是扮作 白井黑子 向参与实验的御坂妹妹们发嗲，结果御坂妹妹们果断以密集火力将其肃清。
御坂网络
运用复制人特有的同振幅脑波所形成的电磁情报网。由于“妹妹们”拥有共同脑波 波形 ，所有“妹妹们”的脑波转化成电子信号彼此连线，从而构筑成“御坂网络”。“妹妹们”共享一份记忆，巨大的网络作为同一个大脑来运作，就好比是一台类似“ 树形图 设计者”的超高能并列演算机。
这个网络是所有妹妹们脑内情报的集合体，同时网络本身也代表了“单一意志”。为了这个“用来人为干扰的控制关键”而准备的，就是最后之作；而一从“单一意志”中特别抽取出恶意思考、感情的就是 番外个体 。00000号 桃莉 则没有连入 御坂网络 。
实际上，在 亚雷斯塔·克劳利 的“计划”当中，御坂网络就像是用来诱导整个学园都市（乃至全世界）AIM扩散力场的路标。
容姿
在外表上与 御坂美琴 相同，但是能力却大幅劣化。穿着与原型 御坂美琴 同样的 常盘台中学 制服，但是和美琴裙底的安全裤不同的是，“妹妹们”全员穿着蓝色条纹小裤裤。摄影机般毫无感情的眼睛，瞳孔暗淡无光，表情变化少，对话时会有“ 御坂 XXX地说道（○○、とミサカは××します）”这样将情感随着发言一同说出口的特征。有时也会很毒舌，会用平稳的口气讲出粗暴内容的话。
性格
因为以“学习装置”急速形成人格，“人类的感情处理方法”还不完全，更没成熟到正确的认识憎恨和恐惧之类的负面感情。因此，“妹妹们”起初并没有感情，不惧怕死亡，也没有什么羞耻观念， 内裤 被看光光，甚至全裸被看到也面不改色。但是由于拥有学习能力，通过“ 御坂网络 ”的积累也会逐渐产生感情。在实验终止后，“御坂妹妹”的个体意识也会渐强，并有成长为个性的可能。性格上为“ 御坂美琴 的人格加上 电波系 大小姐的气质”。
由于曾被 布束砥信 注入感情程序，因而 御坂19090号 是“御坂妹妹”的一般个体中表情最丰富的个体。
不同于“御坂妹妹”的其他个体， 最后之作 和 番外个体 具有独立的意识和丰富的情感。
称呼
御坂 00001-20000号全员自称“御坂”，在同其他御坂交流时则会同时报上检体番号“御坂XXXXX号”以示区别，在与最后之作交流时亦自称“御坂。”最后之作则自称“御坂御坂”，番外个体亦自称“御坂”。
称呼素体 御坂美琴 美琴 为“姐姐大人”， 御坂10032号 则被 上条当麻 称作“御坂妹”。
能力
能力是“缺陷电气（Radio Noise）”。“ Radio Noise ”原意为 无线电 的杂音，因妹妹们的能力远逊于 御坂美琴 的“ 超电磁炮 ”，故如此称之。其性能平均只达到了异能力者（Level 2）的程度，即使是最强个体也没有能超过强能力者（Level 3），“就算集结了两万人，实力也比不上超电磁炮”。由于无法目视 电磁波 ，“妹妹们”经常佩戴将电磁波视觉化的 军用护目镜 。
亦能够放出以 光速 前进的雷击之枪，不同于 御坂美琴 的蓝白色光电，妹妹们的是紫电，威力也只有理论上能够让人立刻 昏迷 的程度。
最后之作 达到Level 3，而作为“御坂妹妹”中最强战力的 番外个体 则达到Level 4。
枪械
经常使用多种枪械作为辅助战力。“妹妹们”全员大都配备对战车用步枪“钢铁破坏者（Metal Eater MX）MX”和冲锋枪F2000R“玩具兵团” 。但也有因地制宜的情况，如驻扎在 俄罗斯 的 御坂10777号 会使用 卡拉什尼科夫自动步枪 。
生活
受素体的基因影响，全员对“呱太”感兴趣，喜欢猫。即使是番外个体，作为“ 御坂 网络”中的一员，在嗜好上也还是很接近小孩子的。
自己的字曾得到 一方通行 “写字像个小鬼”的意外评价。但御坂妹妹基于从 少女漫画 得到的“可爱的字体在写情书等时候非常管用”的知识，对自己的字很有信心。