蔗糖酶又称“转化酶”。糖 酶之一，蔗糖酶（invertase）（β-D- 呋喃 果糖苷 水解 酶）（fructofuranoside fructohydrolase）（ ec 3.2.1.26）特异地 催化 非还原糖中的β-D- 喃果糖苷键水解，具有相对专一性。不仅能催化 蔗糖 水解生成 葡萄糖 和果糖，也能催化棉子糖水解，生成密二糖和果糖。
基本介绍
蔗糖酶。糖苷酶之一。催化蔗糖水解成为果糖和葡萄糖的一种酶，广泛存在于动植物和微生物中，主要从酵母中得到。
自1860 年Bertholet 从 酿酒酵母 Sacchacomyces Cerevisiae 中发现了蔗糖酶以来, 它已被广泛地进行了研究。蔗糖酶（β -D- 呋喃 果糖苷 果糖 水解 酶，fructofuranoside fructohydrolase， invertase）（EC 3.2.1.26）特异地 催化 非还原糖中的α-呋喃果糖苷键水解, 具有相对专一性。不仅能催化 蔗糖 水解生成 葡萄糖 和果糖,也能催化棉子糖水解, 生成密二糖和果糖。
该酶以两种形式存在于酵母细胞膜的外侧和内侧,在细胞膜外 细胞壁 中的称之为外蔗糖酶(external yeast invertase)，其活力占蔗糖酶活力的大部分，是含有50% ~70(质量分数) 糖成分的糖蛋白；在细胞膜内侧 细胞质 中的称之为内蔗糖酶（internal yeast invertase），含有少量的糖。两种酶的 蛋白质 部分均为双亚基（二聚体）结构，2种形式的酶的 氨基酸组成 不同，外酶每个亚基比内酶多2种氨基酸—— 丝氨酸 和 甲硫氨酸 ，它们的分子质量也不同，外酶约为270KD（或220KD,与酵母的来源有关），内酶约为135KD。尽管这两种酶在组成上有较大的差别，但其 底物 专一性和 动力学 性质仍十分相似，但由于内酶含量很少，极难提取。
作用
蔗糖 在蔗糖酶的 催化 下． 水解 为D- 葡萄糖 和D-果糖两种还原糖。蔗糖酶在植物的运输贮藏、 糖类 代谢中发挥主要作用．并在渗透调节、抗逆性生长繁殖、以及信号传导方面也发挥着重要的作用。
植物中蔗糖酶的分类
根据植物中蔗糖酶所处亚细胞位置，蔗糖酶可分为液胞型蔗糖酶、 细胞质 型蔗糖酶和 细胞壁 型蔗糖酶。前两者又统称为胞内蔗糖酶，细胞壁型蔗糖酶又被称为胞外蔗糖酶。不同的蔗糖酶进行反应所需的最适pH值也有所不同，由此蔗糖酶又可分为酸性蔗糖酶和中性/碱性蔗糖酶。液胞型蔗糖酶和细胞壁型蔗糖酶在pH4.5至5.0时 催化 效率最高，因此也称为酸性蔗糖酶。细胞质型 蔗糖 酶 水解 蔗糖的最适pH值为中性或略微偏碱性，因此称为中性/碱性蔗糖酶。而根据其溶解性，蔗糖酶又可分为可溶性蔗糖酶（包括液胞型蔗糖酶和 细胞质 型蔗糖酶）与非溶性蔗糖酶（ 细胞壁 型蔗糖酶）。
提取方法
酵母提纯
酵母 离心 (8 000 r/min)15 min后收集菌体。将收集到的菌体用 蒸馏水 洗涤，离心，再洗涤，重复数次，直到菌体呈白色，倾出上清液，将不含杂质的干净的酵母保存待用。
粗酶液的制备
准确称取离心分离后的酵母10g，加入60mL0．5mmol/L的 SDS溶液 溶解，在pH值为5．5、50℃水浴中加热12h后取出，4℃、10 000 r/min离心20 min．上清液即为粗制酶液。4℃保存。
葡萄糖 标准曲线的制定
以葡萄糖含量为横坐标。以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
蛋白质 标准曲线的制定
以蛋白质含量为横坐标。以吸光度为纵坐标。绘制标准曲线．
蔗糖 酶活性的测定
稀释酶液0．5 mL．加入0．3 mL pH值为4．6、0．1 mol/L的NaAc—HAc缓冲液．0．2 mL 0．1 mol/L的 蔗糖 溶液．37℃准确反应15rain后．加0．125 mL l mol/L的 氢氧化钠 溶液中止反应。用 DNS法测还原糖 法在540 nm波长下测定形成的还原糖量。在该条件下。蔗糖酶液1 min转化 底物 蔗糖生成1g 葡萄糖 定义为1个活力单位。
粗酶的 乙醇 初步分离
在所提粗制酶液中加入乙醇使其质量分数达30%，4℃放置过夜，4℃、10 000 r/min 离心 15 min．取上清液．追加乙醇使其质量分数达50%，4℃放置1 h，4℃、11 000 r/min离心15 min．弃上清液．沉淀用双蒸水溶解．4℃保存。经 SDS 抽提法提取．质量分数50%的乙醇沉淀所得的酶液用 透析 法(pH值为7.0的0.05 mol/L%s—HCI缓冲液)充分透析。所得 透析液 4℃保存。
SDS抽提法提取 酿酒酵母 中蔗糖酶
工艺条件优化：在单因素试验的基础上。选取SDS 摩尔 浓度、pH值、提取温度、提取时间4个条件，考察其对酵母蔗糖酶抽提效果的影响．采用4因素3水平 正交 表L93。做正交试验。
蔗糖酶的纯化
采用O一 琼脂糖 凝胶 FF阴离子交换柱层析纯化粗酶液。将 SDS 抽提法提取出的 蔗糖 酶活性高的粗制酶液经质量分数50%的 乙醇 沉淀，溶解 透析 后，过Q-琼脂糖凝胶FF 阴离子 树脂床 (用pH值为7．0、0．05 mol/L 三羟甲基氨基甲烷 HCl缓冲液充分平衡)。用0～1 mol/L、60 min线性 梯度 的NaCI溶液(内含pH值为7．0、0．05 mol/L%s- HCI 缓冲液)洗脱。体积流量为0．5 mL/min，每管收集mL。测定各管洗脱液的 蔗糖 酶活性与 蛋白质 含量，合并蔗糖酶活力高的若干管流出液。流出液经过透析脱盐,真空干燥后即为纯化的酵母蔗糖酶。