调控序列(regulatory regions and sequence)是一段控制基因表达的 脱氧核糖核酸 片段。
分类
调控序列就是一段控制基因表达的DNA片段调控序列主要有以下几种:
①在5′端 转录 起始点上游约20~30个 核苷酸 的地方,有TATA框(TATA box)。 TATA 框是一个短的核 酸序列,其 碱基 顺序为TATAATAAT。TATA框是 启动子 中的一个顺序,它是 核糖核酸 聚合酶的重要的接触点,它能够使酶准确地识别转录的起始点并开始转录。当TATA框中的碱基顺序有所改变时,mRNA的转录就会从不正常的位置开始。
②在5′端转录起始点上游约70~80个 核苷酸 的地方,有CAAT框(CAAT box)。CAAT框是启动子中另一个短的 核苷酸 序列,其 碱基 顺序为GGCTCAATCT。CAAT框是RNA聚合酶的另一个结合点,它的作用还不很肯定,但一般认为它控制着 转录 的起始频率,而不影响转录的起始点。当这段顺序被改变后,mRNA的形成量会明显减少。
③在5′端转录起始点上游约100个 核苷酸 以远的位置,有些顺序可以起到增强转录活性的作用,它能使转录活性增强上百倍,因此被称为增强子。当这些顺序不存在时,可大大降低转录水平。研究表明,增强子通常有组织特异性,这是因为不同 细胞核 有不同的特异因子与增强子结合,从而对不同组织、器官的基因表达有不同的调控作用。例如,人类 胰岛素 基因 5′末端上游约250个 核苷酸 处有一组织特异性增强子,在胰岛素β细胞中有一种特异性蛋白因子,可以作用于这个区域以增强胰岛素基因的 转录 。在其他组织 细胞 中没有这种蛋白因子,所以也就没有此作用。这就是为什么胰岛素基因只有在胰岛素β细胞中才能很好表达的重要原因。
④在3′端终止密码的下游有一个核苷酸顺序为AATAAA,这一顺序可能对mRNA的加尾(mRNA尾部添加多聚U)有重要作用。这个顺序的下游是一个反向重复顺序。这个顺序经转录后可形成一个发卡结构。发卡结构阻碍了 核糖核酸 聚合酶的移动。发卡结构末尾的一串U与转录模板DNA中的一串A之间,因形成的 氢键 结合力较弱,使mRNA 与DNA杂交部分的结合不稳定,mRNA就会从模板上脱落下来,同时,RNA聚合酶也从DNA上解离下来,转录终止。AATAAA顺序和它下游的反向重复顺序合称为 终止子 ,是 转录 终止的信号
调控方法
(1) 利用RACE技术反向扩增得到5'端,利用 启动子 预测软件寻找调控序列
(2)利用 染色体 步移技术反向扩增得到5'端,利用启动子预测软件寻找调控序列
(3)构建 基因组 文库
(4)随机酶切基因组为300左右的片段,连接到报告载体,能表达着即为启动子
2、如何分析调控序列的功能?
(1)随机酶切基因组为300左右的片段,连接到报告载体,能表达者即为启动子
(2)对调控序列序列片段进行缺失