核蛋白

在细胞质内合成的蛋白质

核蛋白(英文:nuclear protein)是指在 细胞质 内合成,然后运输到核内起作用的一类 蛋白质 。如各种组蛋白、 脱氧核糖核酸 合成酶类、 核糖核酸 转录 和加工的酶类、各种起调控作用的蛋白因子等。

核蛋白一般都含有特殊的氨基酸信号序列,起蛋白质定向、定位作用。

简介

为结合蛋白质中的一类。普遍存在各种生物的 细胞核 中的特殊形态的蛋白质,由 核酸 与组蛋白、精蛋白似的碱性蛋白结合而成为细胞核的主要成分。根据核酸种类的不同,分为 核糖核酸 核蛋白与 脱氧核糖核酸 核蛋白。能从细胞核中提取得到,能溶解1mol/L NaCl溶液中。核蛋白中的 蛋白质 包含组蛋白(或精蛋白)和非组蛋白蛋白质。组蛋白含 碱性氨基酸 如 精氨酸 和 赖氨酸 等丰富的碱性蛋白,为正电荷。精蛋白仅出现在 真核生物 中,含较多 天门冬氨酸 、 谷氨酸 等 酸性氨基酸 ,为酸性蛋白,为负电荷。核蛋白在遗传和蛋白质合成中起着决定性作用,又是生物体内某些病毒和 噬菌体 的唯一组成成分。

介绍

为结合蛋白质中的一类。普遍存在各种生物的 细胞核 里的特殊形态的蛋白质,由 核酸 与组蛋白及其精蛋白等的碱性蛋白结合而成为细胞核的主要成分。核酸种类不同,能分为 核糖核酸 核蛋白及其 脱氧核糖核酸 核蛋白。可从细胞核里提取得到,能溶解于1mol/L NaCl溶液里。核蛋白里的 蛋白质 包括组蛋白(或精蛋白)与非组蛋白蛋白质。组蛋白含 碱性氨基酸 比如 精氨酸 及其 赖氨酸 等丰富的碱性蛋白,为正电荷。精蛋白仅仅出现于 真核生物 里,含较多的 天门冬氨酸 与 谷氨酸 等 酸性氨基酸 ,为酸性蛋白,是负电荷。

关联知识

质的存在

亲核蛋白(karyophilic protein)是指在 细胞质 内合成后,需要或能够进入 细胞核 内发挥功能的一类蛋白质。

核定位序列 (核定位信号,NLS):亲核蛋白一般都含有特殊的氨基酸序列,这些内含的短肽保证了整个 蛋白质 能够通过核孔复合体转运到细胞核内,这段具有“定向”、“定位”作用的序列被称为核定位序列。

核输出信号(NES):作为核内物质输出细胞核的信号,帮助核内某些分子迅速通过核孔进入细胞质,位于核内合成然后被运输到细胞质工作的分子中。

体循环简介

活化的氨基酸在 核糖体 上,以mRNA为模板合成多肽链的过程。

蛋白质合成形式,是指核糖体大小亚基在需要的时候组合形成核糖体,合成蛋白质后解体并在需要的时候重新组合形成核糖体的过程

核蛋白体循环ribosomal cycle:广义的核蛋白体循环是指氨基酸活化后,在核蛋白体上缩合形成多肽链的过程,该过程包括肽链合成的起始,肽链的延长,肽链合成的终止和释放,狭义的核蛋白体循环指多肽链合成过程中肽链延长阶段,它由 进位 ,成肽和转位3个步骤循环进行,直至终止阶段。

提取方法

细胞 和动物组织核蛋白的提取方法

产品组成310001 310002

规格50assays100assays

缓冲器 A(Cytoplasmic Extraction 化学试剂 )10ml 20ml

Buffer B(Nuclear Extraction Reagent)10ml 20ml

蛋白酶 抑制剂 混合物 250ul 500ul

使用方法:

A.细胞蛋白提取

1.取5-10×106个细胞,在4℃,500×g条件下 离心 2-3分钟,小心吸取 培养基 ,尽可能吸干,收集细胞。

2.用冷PBS洗涤 细胞 两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。

3.每20ul细胞压积中加入200μl冷的Buffer A,2ul蛋白酶 抑制剂 混合物,高速 涡旋 振荡15秒,置冰上10分钟。

4.再次高速涡旋振荡5秒,然后在4℃,16000×g条件下离心5分钟。

5.快速将上清吸入另一预冷的干净 离心管 ,即可得到胞浆蛋白,请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。

6.在沉淀中加入200μl冷的Buffer B,2ul 蛋白酶 抑制剂 混合物 ,高速涡旋振荡15秒。

7.置冰上40分钟,每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。

8.在4℃,16000×g条件下 离心 10分钟。

9.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到核蛋白。

B. 组织蛋白 提取

1.取适量组织样本剪碎,加冷 pbs ,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或用 液氮 研磨),冰上静置5分钟,小心将上清吸入另一预冷的干净 离心管 。

2.在4℃,500×g条件下离心2-3分钟,弃上清。

3.按照 细胞 蛋白的提取方法的第3步骤往下操作即可。

上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。

注意事项:

1.实验过程中的所有BestBio-贝博生物试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。

2.整个过程须保持样品处于低温状态。

储存条件:

-20℃保存。

有效期:

一年。

关联种类

核糖核蛋白 (英文:Ribonucleoprotein,简称RNP)是指包含有 核糖核酸 的核蛋白,即将 核酸 和 蛋白质 结合在一起的一种形式。核糖核蛋白包括 核糖体 、 端粒酶 以及小核RNP(snRNP)。RNP在 流感病毒科 A的复制过程中发挥重要作用。核糖核蛋白体又称核蛋白体、核糖核蛋白体。一种亚 细胞核 蛋白颗粒,由大约等量的 核糖核酸 (RNA,35%~55%)和蛋白质(45%~65%)组成。是细胞内蛋白质合成的场所。多个核糖体可以联接成串,形成多聚核糖体。每个核糖核蛋白体在外形上近似球形,直径约20nm。由两个不同的亚基组成(大亚基和小亚基),通过镁离子和其他键非 共价键 地结合在一起。已证实有四类 核糖体 :细菌、植物、动物和 线粒体 ,它们以其 单体 的、亚单位的和核糖核蛋白体 核糖核酸 的沉降系数相区别。核蛋白体有两个结合 转运RNA 的部位(A部位和P部位),并能附上信使RNA,(Rb)。

α-突触核蛋白α-突触核蛋白是一种 中枢神经系统 突触前表达的可溶性蛋白,与 帕金森病 的发病有密切的关系。α-突触核蛋白在各种生理,环境因素的影响下异常表达和聚集,通过一系列的 氧化应激 等生化反应,产生了对 神经元 的毒性作用,从而参与了帕金森病的发生。对α-突触核蛋白的 化学性质 ,聚集的机制及其影响因素的了解与研究,将会十分有利于帕金森病的预防和治疗。α-突触核蛋白是一种在健康人的脑组织中广泛分布的可溶性蛋白,它是 帕金森病 的发病机制中最重要的蛋白,因为它是路易小体的主要结构成分,α-突触核蛋白聚集与路易小体的形成及 多巴胺 能神经元的死亡密切相关。

汉坦病毒属属 核蛋白,汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)的主要病毒,汉坦病毒的基因由L、M、S三个片段构成,分别编码病毒 核糖核酸 聚合酶 ,囊膜核蛋白G1和G2及核 衣壳 蛋白(简称核蛋白,Nucleocapsid Protein,NP)。 血清学 研究表明,汉坦病毒核蛋白具有很强的 反应原性 和 免疫原性 ,同时NP抗原可以与汉坦病毒内的多种 血清型 病毒的免疫血清产生交叉反应,表明汉坦病毒的NP具有共同的抗原决定族。有鉴于此,我们对核蛋白的核心区域进行表达和纯化,并用SDS-PAGE和Western-Blotting对重组核蛋白进行鉴定,为其应用于诊断抗原提供技术依据。