缓冲液是一类能抵抗外来少量 强酸 、 强碱 或稍加稀释而保持其pH值基本不变的溶液,常用来模拟器官、组织和 细胞 生成的生理环境,尤其在生物学、 分子生物学 、细胞生物学实验中,广泛使用缓冲液来维持研究体系的酸碱环境。 缓冲溶液 一般由足够浓度的 共轭酸碱对 的两种物质按适当比例溶解于水形成,共轭酸碱对的两种物质合称为缓冲系( 缓冲器 system)或缓冲对(buffer pair)。
磷酸盐 缓冲液( 磷酸盐 buffer solution, pbs ),其缓冲对为 磷酸二氢钠 与磷酸氢二钠(NaH2PO4-Na2HPO4)或 磷酸二氢钾 与 磷酸氢二钾 (KH2PO4-K2HPO4)。PBS缓冲液中,由于H2PO4-能够二级 离解 ,所以PBS缓冲液能够缓冲的pH值范围很广。正是由于PBS缓冲液能够使溶液pH值在较大的范围内都保持稳定,从而被广泛地应用在 生物化学 研究领域。 这些溶液广泛用于试管内和体外研究,以及实验室稀释液、冲洗 细胞 悬浮液、清洗培养瓶及 培养皿 ;这些溶液也常作为细胞 培养基 的添加物,商业上可用的 pbs 有多种不同的配方,增加钙和镁(+/+PBS)或者不增加(-/-PBS)。
配制方法
含0.05% 吐温20 的pH7.4的 磷酸盐 缓冲液(简称为 PBS- T)配制方法为:
称取 磷酸二氢钾 (KH2PO4), 磷酸二氢钠 (Na2HPO4·12H2O), 氯化钠 (NaCl), 氯化钾 ( 氯化钾 ),吐温-20 ,加水。
PBS:Phosphate Buffered saline
PBS 1L配方pH7.4: 磷酸氢二钾 (KH2PO4):0.27g,
磷酸氢二钠(Na2HPO4):1.42g,
氯化钠(NaCl):8g,
氯化钾(KCl)0.2g,
加 纯水 约800mL充分搅拌溶解,然后加入浓盐酸调pH至7.4,最后定容到1L
保存方法
加去离子水约800mL充分搅拌溶解,然后加入浓盐酸调pH至7.4,最后定容到1L。高温高压灭菌后置于4 摄氏度 冰箱保存待用。
PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L, 氯化钾 2.7mmol/L,Na2HPO4 10mmol/L, KH2PO4 2mmol/L
PBS缓冲液一般作为 溶剂 ,起溶解保护试剂的作用,具体试剂一般也有不同的比例配方,在针对性上就有了更好的效果。
1x PBS 缓冲液就是0.01M的 磷酸盐 缓冲液,可直接使用。2x PBS就是2倍浓度,使用时稀释一倍使用。0.1M的 pbs 一般不用来配置缓冲液,用于其它用处。
作用
PBS是磷酸缓冲 盐溶液 的简称,不仅伪 狂犬病毒 要用它稀释,一般的有活性的 生物制剂 都要用它来稀释。
原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用, 蒸馏水 不具有盐平衡作用,可以破坏生物蛋白的结构及生物特性; 生理盐水 不具有调整pH的作用,对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应,所以使用 PBS 是首选。
PBS也不是万能的,有的生物活性物质需要的条件比PBS还要高,就需要在平衡缓冲液中加入更多的成分,维持最佳的条件保证生物活性物质保持其最完整的特性。